技術文章
Technical articles
使用血清培養(yǎng)凝集試驗方法檢出率很高，而且快速，介紹如下。（1）血清培養(yǎng)凝集試驗在3％胰蛋白胨肉膏湯（或肝化湯）中，加人（1；40）一（1：80）的丹毒高免血清，同時每毫升再加入400leg卡那霉素50／lg慶大霉素及2Stag萬古霉素（缺乏抗生素時，可加0．05％疊氦鈉及o．0005％結晶紫），制成丹毒血清抗生素診斷液（如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內可至少保存2個月）。生前取病豬耳尖血1滴，死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內，37~C培養(yǎng)14-24h。凡管底出現凝集顆粒或團塊時即判...
日本Okayama大學的研究者們建立了檢測豬丹毒的PCR方法（1999）。常規(guī)細菌培養(yǎng)檢測豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內完成。它使用兩步擴增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進行初步擴增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進行擴增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非編碼區(qū)。對該簇編碼的DNA序列進行測定，以設計種特異性PCR檢測系統(tǒng)的引物。豬紅斑丹毒絲...
純化的抗體可通過不同的途徑獲取，就本書中描述的大多數情況而言，這些抗體可通過下述方法制備或從商家購買。從商家購買的抗體，通常附有正確的儲存方法。1．經純化制備的抗體在常用的緩沖液中是穩(wěn)定的。其DH應保持在中性左右。如果pH在7-8之間，即使保存多年，對抗體也無損害。多數情況下，鹽濃度適于保持在0～150mmol／L之間，但在長期存放的抗體中，鹽溶液濃度高達500mmol／L時，對抗體可能有損害。如果沒有其他說明．律議用PBS或50mmol／LTris（DH8．0）溶液長期存放...
免疫親和純化技術常用于從多克隆抗體樣本中純化抗原特異性抗體。在這個過程中，純抗原共價結合于固相支持物上，多克隆混合抗體中的那些對該抗原特異的抗體能和它結合。經過沖洗，將未結合的抗體除去，然后再將特異性抗體洗脫。這種方法不適用于單抗，因為它們與抗原結合的活性相同。免疫親和純化技術常用于下面兩種情況。*種情況是抗肽抗體的制備。在制備抗肽抗體的過程中，要將抗肽抗體所針對的合成肽結合到載體蛋白上，以產生有效的免疫原性。針對肽—載體復合物的多克隆抗體產生后，通常并不能直接使用，而要從血...
[檢測方法]ELISA法[方法學原理]將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯結形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物；再加HRP標羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標記抗體復合物，在此基礎上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。[標本準備]不抗凝靜脈血2ml[試劑]1．日本分體血吸蟲可溶性抗原2．HRP標記羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液4．稀釋液和洗滌液5．酶底物液6．2mol／LH25...
瘧疾（malaria）是瘧原蟲經按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險發(fā)作。常見檢測方法為間接熒光抗體染色法檢測瘧原蟲抗體。[檢測方法][方法學原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結合成相應的抗原抗體復合物，此復合物再與熒光標記抗人IgG抗體結合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標記抗人IgG抗體3．陰性對照、陽性對照血清4．抗原片[檢測步驟...
對于組織培養(yǎng)中生長的細胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質和細胞膜，破壞分子間許多微弱的結合鍵，并能溶解大部分經常研究的蛋白質抗原，但對于大分子多聚抗原則無效，在大多數情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以...
裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細胞一起渦旋振蕩進行機械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉動撞擊酵母菌從而機械破碎裂解酵母細胞。由此可見，這是一種強有力的裂解方法，但在裂解過程中又傳輸大量的能量，導致樣本的變性。因此，和哺乳動物細胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗并不是一個好的方法，特別是研究蛋白質的性質和結構時，該方法是不可取的。1．準備工作由于免疫沉淀有多個步驟，且包括數小時孵育，因此在實驗開始前必須安排好時間，注意適當利用過夜孵育的間隙。這將有助于決定何時開始裂解細胞。...
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